Ti se puferi mogu koristiti za biološke primjene pri neutralnom pH
Tri vrijednosti pKa za fosfornu kiselinu (iz CRC Handbook of Chemistry i Physics) su 2.16, 7.21 i 12.32. Mononatrijev fosfat i njegova konjugirana baza, dinatrijev fosfat se obično koriste za stvaranje pufera pH vrijednosti oko 7, za biološke primjene, kao što je prikazano ovdje.
Izrada ovog spremnika je nešto teža od izrade TAE i TBE pufera. Međutim, nije jako teško. Jednostavno prosječan. Trebalo bi potrajati oko 10 minuta da bi se podigao ovaj tampon. Evo kako.
1. Odlučite o svojstvima spremnika
Prije izrade tampona, prvo morate znati koliko želite molaritet, koliko volumena želite i što je željeni pH. Većina pufera radi najbolje pri koncentracijama između 0,1 M i 10 M. pH treba biti unutar 1 pH jedinice baze baze kiseline / konjugata pKa. Radi jednostavnosti ovaj izračun uzorka bit će za 1 litru pufera.
2. Odredite omjer kiseline u bazi
Upotrijebite Henderson-Hasselbalchovu jednadžbu (dolje) kako biste odredili koji omjer kiseline prema bazi treba da se dobije pufer željenog pH. Koristite pKa vrijednost koja je najbliža željenom pH i odnos će se odnositi na par baze kiseline-baze koji odgovara onom pKa.
HH jednadžba: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
Za pufer pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0,4898
Zamjena za [Acid] i Solve for [Base]
Željena molarnost pufera je zbroj [Acid] + [Base].
Za 1 M pufer, [Base] + [Acid] = 1 i [Base] = 1 - [Acid]
Zamjenjujući to u jednadžbu omjera, od koraka 2 dobivate:
[Acid] = 0.6712 mol / L
Riješite za [Acid]
Koristeći jednadžbu: [Base] = 1 - [Acid], možete izračunati da:
[Baza] = 0,3288 mol / L
3. Miješajte bazu kiseline i konjugata
Nakon što ste upotrijebili Henderson-Hasselbalchovu jednadžbu da biste izračunali koji je omjer kiseline prema bazi potrebna za vaš tampon, pripremite samo ispod 1 litre otopine koristeći točne količine mononatrijevog fosfata i dinatrijevog fosfata.
4. Provjerite pH
Upotrijebite pH sonde kako biste potvrdili da je dostignut odgovarajući pH za pufer. Lagano prilagodite prema potrebi, koristeći fosfornu kiselinu ili natrijev hidroksid (NaOH).
5. Ispravite glasnoću
Nakon postizanja željenog pH, dovedite volumen pufera na 1 litru. Zatim razrijedite pufer po želji. Taj isti pufer se može razrijediti da bi se stvorili puferi od 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M ili bilo što između.
6. Savjeti za pufer
Zapamtite da se pKa ne može lako mjeriti do točne vrijednosti. Malo različite vrijednosti mogu biti dostupne u literaturi iz različitih izvora.
7. Što trebate
Da biste napravili pufer, trebat će vam tri tvari, a preostali materijali su oprema. Tvari su mononatrijev fosfat, dinatrijev fosfat i fosforna kiselina ili natrijev hidroksid da se podesi pH.
Također će vam trebati mjerač pH i sonda i odgovarajući laboratorijski program. To uključuje volumetrijsku tikvicu, stupnjevane cilindre, čaše i šipke za miješanje.
Na kraju, trebat će vam mješavina za kuhanje.