Kako napraviti ovaj imunohistokemijski pufer za bojenje
Fosfatno puferirana slanina (PBS) je puferska otopina koja se obično koristi za bojenje imunohistokemijskog (IHC) i često se koristi u biološkom istraživanju. PBS je otopina soli na bazi vode koja sadrži natrijev hidrogen fosfat, natrijev klorid i, u nekim slučajevima, kalijev klorid i kalijev dihidrogen fosfat.
Imunohistokemijsko bojenje
Imunohistokemija se odnosi na proces otkrivanja antigena kao što su proteini u stanicama sekvencije tkiva primjenom načela protutijela koja se specifično vežu na antigene u biološkim tkivima.
Imunofluorescentna bojenja bila je prva imunohistokemijska metoda bojenja.
Antigeni postaju vidljivi kada se konjugiraju s protutijelima pomoću fluorescentnih boja zbog reakcije vezanja antigena i antitijela. Taj se proces događa kada se aktivira uzbudljivim svjetlom specifične valne duljine pod fluorescentnim mikroskopom.
Osmolarnost i ionske koncentracije otopina odgovaraju onima ljudskog tijela - oni su izotonični.
Recept za PBS
PBS možete pripremiti na nekoliko načina. Postoji više formula. Neki od njih ne sadrže kalij, dok drugi sadrže kalcij ili magnezij .
Ovaj recept je relativno lagan. To je za 10X PBS stock otopinu (0,1 M). Međutim, također možete napraviti 1X stock rješenje, ili početi s ovim 10X receptom i razrijediti ga na 1X.
Cijeli proces traje oko 10 minuta.
Dostupna je i mogućnost dodavanja Tweena.
Što trebate napraviti PBS pufer
- Jednobazni natrijev fosfat (bezvodni)
- Dvobazni natrijev fosfat (bezvodni)
- Natrijev klorid
- Skale i vagajte brodove
- Magnetski mješač i mješalica
- PH sonde koja je kalibrirana i odgovarajuća rješenja za podešavanje pH
- 1L volumetrijsku tikvicu
- Tween 20 (izborno)
Kako napraviti fosfatni puferirani salin (PBS)
Izvažite 10,9 g bezbojnog dvobaznog natrijevog fosfata (Na2HP04), 3,2 g bezvodnog monobaznog natrijevog fosfata (NaH2P04) i 90 g natrijevog klorida (NaCl).
Otopiti u tek nešto manje od 1 litre destilirane vode.
Namjestite pH na 7.4 i napravi otopinu do konačnog volumena od 1 L.
Razrijediti 10X prije uporabe i po potrebi ponovno namjestiti pH.
Možete napraviti PBS otopinu koja sadrži 0,5 posto Tween 20 dodavanjem 5 mL Tween 20 u 1L otopinu.
Savjeti za izradu PBS pufera
Čuvajte pufer na sobnoj temperaturi nakon što ste napravili PBS otopinu.
Ne-bezvodni reagensi mogu biti zamijenjeni, ali morat ćete ponovno izračunati odgovarajuću masu svake za smještaj dodatnih molekula vode.
Uporaba fosfatno puferiranog slane otopine (PBS)
Fosfatno puferirana slanina ima mnogo koristi jer je izotonična i netoksična za većinu stanica. Može se koristiti za razrjeđivanje tvari i često se koristi za ispiranje kontejnera stanica. PBS se može upotrijebiti kao razrjedivač u različitim metodama suhim biomolekulama, jer će molekule vode u njemu biti strukturirane oko supstance-proteina, na primjer. To će biti "osušeno" i imobilizirano na čvrstu površinu.
PH ostaje stabilan i konzistentan da spriječi uništavanje stanica.
Tanki sloj vode koji se veže na tvar sprječava denaturaciju ili druge konformacijske promjene. Puferi karbonata mogu se koristiti za istu svrhu, ali s manje učinkovitosti.
PBS se također može koristiti za uzimanje referentnog spektra pri mjerenju adsorpcije proteina u elipsometriji.